Развернутая диагностика склеродермии, IgG (иммуноблот антинуклеарных антител: анти-Scl-70, CENT-A, CENT-B, RP11, RP155, Fibrillarin, NOR90, Th/To, PM-Scl 100/75, Ku, PDGFR, Ro-52)

Исследование, направленное на определение антинуклеарных антител, для диагностики и дифференциации склеродермии, формы и тяжести течения заболевания, поражения органов и систем.

Синонимы русские

Антинуклеарные антитела; иммуноблотинг; лайн-блоттинг; системная склеродермия.

Синонимы английские

Antinuclear antibodies (ANA); lain-blot; systemic sclerosis.

Метод исследования

Иммуноблотинг.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Системная склеродермия (склеродермия) – это хроническое аутоиммунное системное заболевание соединительной ткани. К основным клиническим проявлениям заболевания относятся локальный или распространенный фиброз кожи, нарушение микроциркуляции и вовлечение в патологический процесс некоторых систем и органов. При диффузной форме склеродермии, помимо поражения кожи, может отмечаться фиброз легких, развитие дыхательной недостаточности, поражение сердца, почек, пищевода, нервной системы, суставов. При лимитированной форме заболевания отмечается изолированное вовлечение в патологический процесс кожи. Известно также состояние, представляющее собой доброкачественную форму диффузной склеродермии — CREST-синдром. Для него характерно наличие подкожных кальцинатов, синдром Рейно, эзофагит, склеродактилия и телеангиэктазии на коже туловища.

В основе лабораторной серологической диагностики системной склеродермии лежит выявление антинуклеарных антител, играющих также большую роль в патогенезе заболевания. Данные антитела могут встречаться у 80-95 % больных склеродермией. Антинуклеарный фактор, определяемый методом непрямой иммунофлюресценции на клеточной линии HEp-2, выявляется у 90 % больных склеродермией. Метод иммуноблотинга является подтверждающим тестом, позволяющим выявлять антитела к более широкому спектру антигенов, характерных для данной патологии. К ним относятся антитела к Scl-70, CENT-A, CENT-B, RP11, RP155, Fibrillarin, NOR90, ThTo, PM-Scl 10075, Ku, PDGFR и Ro-52 антигенам.

Антитела к Scl-70 (топоизомеразе-1) направлены к негистоновому белку массой 70 кДа и могут быть обнаружены у 13-35 % больных ССД. Они встречаются чаще у больных с диффузной формой заболевания, свидетельствуют о тяжелом течении заболевания с вовлечением в патологический процесс легких, сосудов почек, сердца, мышц, суставов, а также коррелируют с активностью заболевания.

Антитела к центромерам (CENТ-A и CENТ-В) направлены к белкам-компонентам центромер и обнаруживаются у 20-30 % больных склеродермией. Они являются диагностическим маркером CREST-синдрома и чаще всего свидетельствуют о благоприятном течении заболевания, лимитированной форме склеродермии. Также следует отметить, что обнаружение данных антител может коррелировать с развитием легочного фиброза, поражения пищевода. Они могут быть обнаружены при других аутоиммунных заболеваниях: системной красной волчанке, ревматоидном артрите, аутоиммунном тиреоидите.

Антитела к РНК-полимеразам (RP 11, RP 155) являются высокоспецифичными для системной склеродермии, чаще встречаются у больных с диффузной формой заболевания (30-40 %). Они взаимосвязаны с тяжелым течением заболевания, развитием легочного фиброза, поражением почек, сердца.

Антитела к фибрилларину (fibrillarin) направлены против белковых компонентов U3 ядерного рибонуклеопротеинового комплекса и встречаются у 4 % больных склеродермией. Чаще они выявляются совместно с другими антителами: к центромерам, Scl-70 или РНК-полимеразам. Обнаружение данных антител у больных склеродермией может свидетельствовать о тяжелом течении заболевания с поражением внутренних органов. Они могут быть обнаружены при других аутоиммунных заболеваниях: системной красной волчанке, смешанном заболевании соединительной ткани, ревматоидном артрите.

Антитела к антигену NOR-90 встречаются редко, ассоциированы с лимитированной формой системной склеродермии.

Антитела к Th/To обнаруживаются в 2-5 % случаев заболевания, преимущественно при лимитированной форме склеродермии. Описывается взаимосвязь обнаружения данных антител с поражением легких, развитием легочной гипертензии, а также с поражением суставов.

Антитела к PM-Scl направлены к белкам массой 100 и 75 кДа, являются диагностическим лабораторным показателем перекрестного синдрома, для которого характерны клинические проявления склеродермии и полимиозита. Они могут быть обнаружены у 3 % больных ССД и у 8 % больных полимиозитом. Их выявление ассоциировано с поражением кожи, суставов, пищевода у больных системной склеродермией. Антитела к PM-Scl75 чаще обнаруживаются у лиц детского возраста.

Антитела к Ku антигену встречаются в 1-14 % случаев системной склеродермии. Они могут выявляться при перекрестном синдроме, сочетающем клинические проявления склеродермии и полимиозита/дерматомиозита. Описано наличие антител к Ku у больных системной красной волчанкой, синдромом Шегрена.

Встречаемость антител к рецептору фактора роста тромбоцитов (PDGFR) очень редка. Но данный показатель является высокоспецифичным для системной склеродермии и взаимосвязан с распространенным поражением кожи, легочным фиброзом.

Антитела к Ro-52 (Robert) направлены к антигену, представленному полипептидом, массой 52 кДа. Они встречаются при различных аутоиммунных заболеваниях: системной красной волчанке, дискоидной волчанке, синдроме Шегрена, системной склеродермии, ревматоидном артрите, смешанном заболевании соединительной ткани, аутоиммунных заболеваниях печени.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики и дифференциальной диагностики системных заболеваний соединительной ткани;
  • для диагностики системной склеродермии и различных форм заболевания (лимитированная, диффузная, смешанная);
  • для прогнозирования и подтверждения поражения различных органов и систем у больных склеродермией;
  • для диагностики CREST-синдрома;
  • для диагностики причин возникновения синдрома Рейно, склеродактилии, легочного фиброза при отсутствии характерных клинических проявлений заболевания;
  • для диагностики перекрестных синдромов склеродермии и других заболеваний, в частности полимиозита.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на системное заболевание соединительной ткани;
  • при клинических проявлениях, характерных для системной склеродермии;
  • для диагностики форм системной склеродермии (лимитированная, диффузная, смешанная);
  • при подозрении на вовлечение в патологический процесс внутренних органов;
  • для мониторинга активности системной склеродермии, тяжести течения заболевания;
  • для контроля эффективности проводимого лечения.

Что означают результаты?

Референсные значения

Компонент

Референсные
значения

Антитела к Th/To

не обнаружены

Антитела к RP155

не обнаружены

Антитела к RP11

не обнаружены

Антитела к PDGFR

не обнаружены

Антитела к NOR90

не обнаружены

Антитела к Fibrillarin

не обнаружены

Антитела к CENP-A

не обнаружены

Антитела к PM-Scl 75

не обнаружены

Антитела к PM-Scl 100

не обнаружены

Антитела к Ku

не обнаружены

Антитела к SS-A (52 кДа

не обнаружены

Антитела к Scl-70

не обнаружены

Антитела к Th/To

не обнаружены

Варианты результата:
— пограничный результат (+/-);
— низкое содержание аутоантител к
специфическому антигену (1+);
— среднее содержание аутоантител к
специфическому антигену (2+);
— высокое содержание аутоантител к
специфическому антигену (3+).

Причины обнаружения антител:

Антитела к Scl-70:

  • системная склеродермия;
  • диффузная форма склеродермии;
  • поражение легких, сосудов, почек, сердца, мышц, суставов.

Антитела к центромерам (CENТ-A и CENТ-В):

  • системная склеродермия;
  • лимитированная форма склеродермии;
  • CREST-синдром;
  • системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит.

Антитела к РНК-полимеразам (RP 11, RP 155):

  • системная склеродермия;
  • диффузная форма склеродермии;
  • поражение легких, развитие легочного фиброза, поражение почек, сердца.

Антитела к фибрилларину (fibrillarin):

  • системная склеродермия с поражением внутренних органов;
  • системная красная волчанка, смешанное заболевание соединительной ткани, ревматоидный артрит.

Антитела к NOR-90:

  • лимитированная форма системной склеродермии.

Антитела к Th/To:

  • лимитированная форма системной склеродермии;
  • склеродермия с поражением легких, суставов.

Антитела к PM-Scl100/75:

  • системная склеродермия;
  • перекрестный синдром (склеродермия/полимиозит);
  • поражение кожи, суставов, пищевода, легких.

Антитела к Ku:

  • системная склеродермия;
  • перекрестный синдром (склеродермия/полимиозит);
  • системная красная волчанка;
  • синдром Шегрена.

Антитела к PDGFR:

  • системная склеродермия.

Антитела к Ro-52:

  • системная красная волчанка;
  • системная склеродермия;
  • синдром Шегрена;
  • ревматоидный артрит;
  • смешанное заболевание соединительной ткани;
  • аутоиммунные заболевания печени.

Причины отсутствия антител:

  • отсутствие склеродермии и/или наличие другого аутоиммунного заболевания;
  • ложноотрицательный результат, требующий повторного обследования на уровень аутоантител.

Что может влиять на результат?

  • Течение заболевания, проводимое лечение и прием лекарственных препаратов.



Важные замечания

  • Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, в сочетании с клиническими данными, данными анамнеза, лабораторного и инструментального обследования. Системное аутоиммунное заболевание, в частности системная склеродермия, при отсутствии клинической картины не может быть диагностировано только на основании выявления специфичных антинуклеарных антител.
  • Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает системного аутоиммунного заболевания соединительной ткани, системной склеродермии.

Также рекомендуется

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой и СОЭ

Антинуклеарный фактор на HEp-2-клетках

Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)

Скрининг болезней соединительной ткани

Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг

Кто назначает исследование?

Терапевт, врач общей практики, ревматолог, кардиолог, пульмонолог, педиатр, дерматовенеролог.

Литература

Для чего это нужно

Антинуклеарные антитела (АНА) к экстрагируемым ядерным антигенам — антитела к растворимым компонентам клеточного ядра — рибонуклеопротеинам. В здоровом организме такие антитела. При аутоиммунной патологии иммунная система начинает синтезировать антитела к клеткам организма и их компонентам.

Основной метод определения, какие антитела образовались при положительном антинуклеарном факторе, – это иммуноблотинг. Данный анализ позволяет дифференцировать различные системные заболевания соединительной ткани, так как дает возможность одновременно выявить антитела к нескольким различным внутриклеточным структурам.

Анти-Sm (Smith) – антитела к U1-, U2-, U4-рибонуклеопротеинам – специфичны для системной красной волчанки (СКВ).

Антитела к антигенам RNP (anti-ribonucleoprotein) – это антитела к белковым компонентам малого ядерного нуклеотида – U-1-РНК. Они обнаруживаются при смешанных заболеваниях соединительной ткани (синдроме Шарпа), реже при системной красной волчанке и других ревматических заболеваниях.

Антитела к SS-A (Ro) направлены на белки, связанные с РНК Y1-Y5 в составе сплайсосомы. Эти антитела наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена и системной красной волчанке.

Анти-SS-B(La)-антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3, выявляются при болезни Шегрена и в начальном периоде системной красной волчанки, развивающейся в пожилом возрасте и ассоциирующейся с низкой частотой развития нефрита.

Антитела к Scl-70 (антисклеродермальные антитела с молекулярной массой 70 кДа, антитела к топоизомеразе I) чаще появляются при диффузной (40 %), реже при ограниченной (20 %) форме системной склеродермии, CREST-синдроме.

Антитела anti-PM/Scl – специфический серологический маркер для подгруппы больных склеродермией (Scl), полимиозитом (PM) и особенно для тех, у кого наблюдается совокупность симптомов обоих заболеваний (PM/Scl).

Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.

Антицентромерные антитела (анти-CENT-B) обнаруживаются у больных склеродермией, системной красной волчанкой (СКВ) и ревматоидным артритом.

Анти-Jo-1-антитела (антитела к гистидин-тРНК-синтетазе) впервые были обнаружены в сыворотке крови больных миозитом. У большинства больных с повышенным уровнем антисинтетазных антител выявляется интерстициальная болезнь легких, феномен Рейно.

Антитела к гистонам представляют собой одну из разновидностей антитуклеарных антител и определяются в основном при системной красной волчанке, являясь ее ранними маркерами.

Антитела к нуклеосомам – чувствительный маркер системной красной волчанки. Они определяются исключительно при СКВ, нередко осложненной поражением почек (люпус-нефритом).

АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20 % больных с СКВ. Они взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы, почек и печени.

Анти-AMA-M2 – антитела к антигенам митохондрий М-2, расположенным на внутренней мембране органеллы в виде комплекса ферментов. Данные антитела синтезируются при первичном билиарном циррозе и указывают на его тяжелое течение.

Информация об исследовании

Антитела к антигенам SS-A(Ro) наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена, болезни Шегрена и при системной красной волчанке. При системной красной волчанке продукция данных антител ассоциируется с определенным набором клинических проявлений и лабораторных нарушений: фотосенсибилизацией, синдромом Шегрена, гиперпродукцией ревматоидного фактора. Присутствие этих антител в крови беременных увеличивает риск развития неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденных. Антитела к SS-A(Ro) в сочетании с антителами к SS-B(La) вызывают развитие волчанки новорожденных. Основное проявление этого синдрома — врожденные нарушения проводимости миокарда; часто блокады настолько выражены, что требуют проведения электрокардиостимуляции. Поражения кожи у новорожденных также относятся к проявлениям неонатальной красной волчанки. У пациенток с СКВ, имеющих антитела к SS-A(Ro) (особенно к 52 кД-компоненту), риск рождения ребенка с неонатальным волчаночным синдромом повышается на 4-5 %. У 40 % таких детей наблюдается только поражение кожи, у 40 % — врожденные блокады сердца, а у 10-20 % — оба симптома. Почти 50 % детей с врожденными блокадами сердца нуждаются в постоянной электрокардиостимуляции, а 10 % погибают при ее отключении.

Назначение: набор ORGENTEC Anti-SS-A 60 предназначен для количественного определения IgG-антител антигену SS-A 60 в образцах человеческой сыворотки или плазмы крови методом иммуноферментного анализа с целью диагностики аутоиммунных заболеваний, например, синдрома Шегрена. Антигены: высокоочищенный антиген SS-A 60 (Ro 60). Диапазон измерения: 0.5-200 Е/мл. Аналитическая чувствительность: 0.5 Е/мл. Клиническая чувствительность: 70.8% для синдрома Шегрена. Клиническая специфичность: 97.0%. Стандартизация: тест-система прокалибрована по международно признанному стандарту сыворотки CDC, Атланта, США, так как других международных стандартов не существует. Приложения теста: заболевания соединительной ткани (ЗСТ) относятся к группе аутоиммунных заболеваний, которые характеризуются наличием антинуклеарных антител (ANA) в крови пациентов. ANA- это определенный класс аутоантител, которые способны связывать и разрушать определенные структуры в ядре клеток. Эти антитела вовлечены в патогенез заболеваний и также являются основой для диагностики и лечения ЗСТ. ANA были разделены на две основные группы: 1 Аутоантитела к ДНК и гистонам. 2 Аутоантитела к экстрагируемым ядерным антигенам (ENA): SM, рибонуклеопротеины (RNP), SSA/Ro, SSB/La, SCL-70, Jo-1 и PM1. Аутоантитела к ДНК и гистонам включают антитела против одно-и двуспиральной ДНК (ssDNA и dsDNA). Значительные уровни анти- dsDNA антител рассматривают как подтверждающие в диагностике системной красной волчанки (СКВ). Антигистоновые антитела свидетельствуют о лекарственной волчанке. Кроме ДНК и гистонов мишенью аутоантител могут быть другие ядерные антигены. Эти ядерные антигены были названы экстрагируемыми (ENA), так как вначале были экстрагированы из ядер солевым раствором. Аутоантитела к антигену Смита (Sm), которая считается также весьма специфичными для СКВ, были впервые обнаружены как анти-ENA. Затем были идентифицированы другие ENA: рибонуклеопротеины (RNP), антигены A и B Шегрена (антигены SSA/Ro и SSB/La), SCL-70, Jo-1 и PM1. Хотя большинство ENA являются болезнь-специфичными, существует значительное перекрытие. Чувствительность и специфичность могут поэтому варьировать в зависимости от типа основного ЗСТ. Наличие аутоантител в сыворотке крови больных является одним из критериев, используемых для диагностики ЗСТ. Вместе с клиническим диагнозом определение видов ANA помогает идентифицировать конкретное ЗСТ. В повседневной практике для обнаружения ANA обычно используются тесты непрямой иммунофлуоресценции (IF) и иммуноферментный анализ (ELISA). Первоначальный скрининг осуществляется IF-ANA или ELISA, который обнаруживает ANA широкой специфичности, схожей с IF-ANA. Если результат положительный, проводятся более специфичные исследования на основе клинических данных и IF-ANA специфического паттерна свечения. Эти антиген-специфические ELISA тесты реагируют с единичным аутоантигеном, например, dsDNA, SS-A/Ro, SS-B/La, SCL-70, Sm, Sm/RNP и т.д. Аутоантитела к двуспиральной ДНК специфичны для СКВ и являются диагностическим критерием СКВ, и их уровни повышаются при активной болезни. Недавно опубликованное руководство ACR по скринингу, лечению и контролю волчаночного нефрита рекомендуют анализ антител к двуспиральной ДНК для мониторинга волчаночного нефрита: начиная с интервалов каждый месяц у беременных пациенток с активным гломерулонефритом в начале лечения до интервалов каждые три месяца у пациентов с активным нефритом на фоне лечения или у беременных пациенток с прошедшим, но не текущим нефритом; и до интервалов раз в шесть месяцев у пациентов с прошедшим активным нефритом или без прошедшего или текущего нефрита. У больных СКВ, у которых не выявляют антитела к dsDNA, часто выявляют антитела против одноцепочечной ДНК (ssDNA). Точно также анти-Sm высоко специфичны для СКВ, но присутствует только у 10-30% пациентов с СКВ. Антитела против dsDNA, гистонов, белка 70 кДа комплекса U1 snRNP (RNP70) и анти-Sm тесно связаны с СКВ. Анти-SSA/Ro и анти-SSB/La антитела характерны для синдрома Шегрена, но также могут быть найдены в 30% случаев СКВ с поражением кожи. Анти-SS-A/Ro антитела проходят через плаценту и могут вызвать развитие СКВ у новорожденных. Анти-SSA/Ro антител почти всегда присутствуют в сыворотке крови матерей новорожденных с синдромом неонатальной волчанки и с врожденной полной блокадой сердца. Антинуклеолярные антитела представляют собой группу аутоантител, которые дают ядрышковый паттерн свечения в IF. Наиболее распространенными из них являются анти-PM-SCL, анти-РНК-полимераза I-III и анти-U3-RNP. Их обнаруживают при склеродермии и полимиозите (ПМ). Антитела к RNP и комплексу RNP/Sm связаны с смешанным заболеванием соединительной ткани (MCTD, синдром Шарпа) и СКВ. Серологически MCTD характеризуется наличием аутоантител, направленных против белка 70 кДа комплекса U1-snRNP. До 100% пациентов с MCTD имеют высокие титры анти-RNP-70 аутоантител. Особенности нахождения различных комбинаций антител и их концентрации вместе с общей клинической картиной пациента — важный диагностический инструмент в оценке ревматоидных аутоиммунных заболеваний. Аутоантитела против SS-52 (белка лигазы) находят преимущественно при коллагенозах, особенно синдроме Шегрена и различных формах системной красной волчанки. Аутоантитела против SS-52 специфичны для синдрома Шегрена, но меньше, чем анти-SS-60 аутоантитела. Они появляются также при миозите вместе с другими миозит-специфическими антителами, такими как анти-SRP, анти-PM-Scl, или антитела против аминоацил-тРНК-синтетазы, хотя у этих пациентов не существует никакой связи к синдромом Шегрена. Похоже, что SS-52 аутоантитела связаны с патогенезом врожденной блокады сердца и различными формами СКВ. Подобно белку SS-52, SS-60 связывается с малыми РНК и рибонуклеопротеиновыми частицами в ядре клетки и цитоплазме, а также является компонентом человеческого цитоплазматического рибонуклеопротеинового комплекса. Аутоантитела против SS-60, в первую очередь, находят у пациентов с синдромом Шегрена и системной красной волчанкой. SS-60 антитела часто появляются вместе с анти-SS-B и анти-SS-52 антителами. Этот тест используется для дифференциальной диагностики и мониторинга системных воспалительных ревматических аутоиммунных заболеваний.

Нет Ответов

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *